金匱腎氣丸對腎陽虛證模型小鼠抗寒抗疲勞能力的改善效果觀察

實驗室設計與建設專家 發佈 2020-04-21T23:38:54+00:00

【實驗目的】本實驗以外源性糖皮質激素製作小鼠腎陽虛模型,觀察小鼠的一般情況和抗寒、抗疲勞的能力,並以補腎方劑——金匱腎氣丸進行佐證,驗證中醫腎陽虛證模型的造模方法,加深學生對腎陽虛證和金匱腎氣丸治療作用的認識。



【實驗目的】

本實驗以外源性糖皮質激素(氫化可的松琥珀酸鈉)製作小鼠腎陽虛模型,觀察小鼠的一般情況和抗寒、抗疲勞的能力,並以補腎方劑——金匱腎氣丸進行佐證,驗證中醫腎陽虛證模型的造模方法,加深學生對腎陽虛證和金匱腎氣丸治療作用的認識。

【實驗原理】

用一定劑量的外源性糖皮質激素(如氫化可的松琥珀酸鈉)使垂體前葉的促腎上腺皮質激素(ACTH)釋放受抑,轉而使腎上腺皮質分泌類固醇激素減少,動物出現耗竭現象,如拱背、蜷曲、游泳和耐寒時間縮短,畏寒肢冷且擠臥在一起,製作成功腎陽虛小鼠模型後,再灌服補腎陽代表方劑——金匱腎氣丸,比較觀察三組動物的變化。

【實驗對象】

清潔級昆明種小鼠,體重18g±2g。

【實驗材料】

器材:注射器,剪刀,鑷子,天平,游泳池。

試劑:氫化可的松琥珀酸鈉,金匱腎氣丸。

【方劑解讀】

金匱腎氣丸出自《金匱要略》一書。它由炮附子、熟地黃、山茱萸、澤瀉、肉桂、丹皮、山藥、茯苓八味藥組成。功效是溫化腎氣,溫補腎陽。主治腎陽不足,症見腰膝酸軟,下半身常有冷感,少腹拘急,煩熱不得臥而反倚息,小便不利或小便過多,陽痿精冷,舌質淡而胖,脈虛弱,尺部沉微,以及痰飲、消渴、腳氣等證。

方中熟地黃甘溫,滋陰補腎為主藥;輔以山茱萸、山藥補肝益脾,以補充精血,山茱萸酸,微溫,補肝腎、澀精氣;再配少量附子、肉桂溫腎助陽,補命門真火,引火歸原;佐以澤瀉通調水道,泄腎中水邪;茯苓健脾滲濕,以丹皮清泄肝火,並制山茱萸的溫澀。

【實驗步驟】

1. 試劑的配製 氫化可的松琥珀酸鈉注射液:以生理鹽水稀釋成濃度為1mg/0.1mL,每次注射前搖勻。

2. 標號與分組 以市售染髮劑進行標號(標號方法請參見本書第三章第四節「分組、編號及標記方法」),後隨機將小鼠分為正常對照組、模型組和治療組(給予金匱腎氣丸治療),每組10隻。

3. 造模與給藥 實驗開始的第1天,造模組與給藥組每日每隻小鼠大腿外側肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉1mg,共注射8天,正常對照組則每日每隻小鼠注射生理鹽水0.1mL,共8天。於造模當天治療組給予金匱腎氣丸臨床等效量灌胃(劑量為0.1g/100g體重),每日1次。正常對照組和模型組則灌服等體積的生理鹽水。觀察小鼠在每天注射氫化可的松琥珀酸鈉後的體徵表現,並進行記錄(最好留錄像資料)。

4. 稱重 試驗中每天稱取小鼠的體重,記錄在下面表格中(表6-1)。


5. 冰水實驗 於實驗的第8天,分別取三組小鼠各10隻同時放入4℃冰水中,計算其在冰水中游泳疲勞直至死亡的時間(表6-2)。


6. 取材 待小鼠死亡後立即取出,迅速在冰上摘取全臟器,計算各臟器指數。計算公式:各臟器指數=臟器重量/體重×100%(表6-3)。



7. 統計學處理 使用SPSS10.0統計軟體,用單因素方差分析方法進行數據統計。

【注意事項】

1. 冰水游泳實驗時注意防止小鼠之間的踩踏,因此一定注意保持小鼠之間的隔離。

2. 動物游泳時注意標號是否牢固,以免各組之間混淆。

【結果與分析】

1. 一般情況,造模小鼠在注射氫化可的松後可逐漸出現委靡不振、豎毛、拱背少動、反應遲鈍等腎陽虛現象,伴隨體重下降或體重不增,灌服金匱腎氣丸後動物的上述表現有所改善。

2. 對冰水游泳直至死亡時間的改善作用:腎陽虛小鼠冰水中游泳直至死亡的時間明顯短於正常組,二者比較具有統計學意義,而金匱腎氣丸治療組與模型組比較,藥物能夠顯著延長腎陽虛小鼠的游泳疲勞直至死亡的時間。

3. 臟器指數的計算結果顯示,模型組動物各臟器指數均有所下降,而金匱腎氣丸能夠改善上述變化。

【探索問題】

1. 外源性腎上腺素導致腎虛的機制是什麼?

2. 腎陽虛的基本表現是什麼?

3. 補腎的方劑有哪些?如何選擇補腎陽的方劑?

4. 金匱腎氣丸發揮作用的機制是什麼?

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