草莓種植技術|草莓組培脫毒技術

毛氏部落 發佈 2020-08-03T14:39:20+00:00

蚜蟲、薊馬、粉虱等刺吸式害蟲也能傳播病毒,導致病毒在草莓植株上不斷地積累和蔓延。目前還沒有防治病毒病發生的有效藥劑,實現草莓無病毒栽培的唯一有效途徑就是脫除草莓植株中的病毒,獲得無病毒原種,而後以此大量繁育無病毒苗,不斷滿足生產的需要。

草莓極易感染病毒,草莓種苗生產系無性繁殖,感染病毒的母株會將病毒直接通過匍匐莖傳遞給子苗;蚜蟲、薊馬、粉虱等刺吸式害蟲也能傳播病毒,導致病毒在草莓植株上不斷地積累和蔓延。目前還沒有防治病毒病發生的有效藥劑,實現草莓無病毒栽培的唯一有效途徑就是脫除草莓植株中的病毒,獲得無病毒原種,而後以此大量繁育無病毒苗,不斷滿足生產的需要。

草莓感染病毒後通常不會死亡,但會造成生長勢減弱,莖葉黃化,開花、結果數量減少,果實變小,成熟期推遲;嚴重時葉片皺縮、果實畸形、植株矮化,產量和品質大幅度下降。據調查,國內草莓產區病毒病非常普遍,帶病毒株率達80%以上。

一、草莓脫毒方法

草莓脫毒通常有熱處理、莖尖培養和花葯培養3種方法。

1、熱處理脫毒

在特定的高溫條件下熱處理草莓植株,使其體內的病毒被鈍化,長出的新枝葉或新植株則可能不帶有病毒。

2、莖尖培養脫毒

病毒在植株的各器官和組織中分布並不均勻,莖尖分生組織一般都不會感染或很少感染病毒。採用莖尖組織離體培養可以獲得無病毒苗是目前草莓脫毒中應用最廣的方法。

3、花葯培養脫毒

在草莓現蕾期採集處於單核期的花葯,經過誘導培養形成愈傷組織,再經過分化、增殖、生根培養,可以脫除病毒,獲得無病毒苗。

二、草莓莖尖脫毒苗生產的基本程序

草莓莖尖脫毒苗生產的基本程序如上圖。

三、莖尖培養技術

1、接種材料準備

(1)母株選擇取樣的母株可在生產田中挑選,選擇結果性狀好、品種種性純正的植株作為母株,入選的植株要掛牌標記或單獨種植,防止品種混雜。

(2)匍匐莖選取選取時間為5~6月,接種前選擇母株發生的健壯匍匐莖,剪取長度為10~15cm,取樣後要立即將匍匐莖基部插在盛水容器中,防止失水。

(3)匍匐莖前處理將田間匍匐莖除去不需要的部分,將所需部分切割至長度為5~8cm,置於自來水龍頭下流水沖洗15分鐘,用洗衣粉水(每5g洗衣粉兌100mL水)浸泡10分鐘,再用自來水沖洗30分鐘。

(4)匍匐莖消毒處理將經上述預處理、瀝乾水的匍匐莖放入廣口瓶或燒杯,移至超凈工作檯,用70%乙醇滅菌10~30秒,再用0.1%氯化汞溶液滅菌10~15分鐘或20%次氯酸鈉溶液中8~10分鐘,然後用無菌水清洗3~5遍,倒出、瀝去最後一次清洗用水後備用。

2、培養基

草莓培養通常採用MS培養基,如上圖。

(1)母液的配置

(2)培養基配置

以配置1000mL培養基為例,具體操作步驟如下:

①在1000mL的燒杯中先加入少量蒸餾水,分別添加母液Ⅰ20mL,母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10mL,母液Ⅴ5mL.

②加入蔗糖30g.

③根據用途培養基分為初代培養基、增殖培養基和生根培養基,要根據其不同用途、不同草莓品種對應添加不同種類的生長調節劑。

④用玻璃杯充分攪拌後,再用蒸餾水定容到1000mL.

⑤調節pH值至5.7~5.8.

⑥添加瓊脂粉7~8g.

⑦加熱至瓊脂粉溶解後分裝到試管或培養瓶中。

(3)培養基滅菌

分裝完成後,將試管或培養瓶放入高壓滅菌鍋中,在溫度121℃時,高壓滅菌15分鐘,滅菌結束後及時取出,冷卻後放入無菌接種室中待用。

3、無菌操作步驟

①接種3天前用甲醛熏蒸接種室,接種前3小時打開紫外線燈進行殺菌。

②在接種前20分鐘,打開超凈工作檯的風機以及台上的紫外線燈。

③接種員先洗凈雙手,換好專用實驗服。

④上工作檯後,用酒精棉球搽拭雙手,然後搽拭工作檯面。

⑤先用酒精棉球搽拭接種工具,再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍,然後反覆過火尖端處。

⑥接種時,接種人員雙手不能離開工作檯,不能說話、走動或咳嗽等。

⑦在接種過程中要經常灼燒接種器械,防止交叉污染。

⑧接種完畢後要清理乾淨工作檯,用紫外線燈滅菌30分鐘。

4、 初代培養

在無菌條件下,取已消毒的匍匐莖生長點0.2~0.5mm,接種到已滅菌的培養基上,1周左右莖尖轉綠並萌動,20~30天形成芽叢。

5、繼代培養

無菌條件下將已分化的芽叢切割,轉入增殖培養基中進行增殖。45天後每個芽可獲5~7個腋芽芽叢。

6、 生根培養

當增殖芽數量達到生產要求時,轉入生根培養基中進行生根培養。生根時間為20~30天。

7、 馴化培養

當生根苗的根系長度達到1.5cm時,將瓶苗移到溫室中,逐步開啟培養瓶蓋,馴化3~5天,然後將苗取出,清洗掉沾在根部的培養基,將苗定植於營養缽或穴盤中馴化培養。馴化培養條件:溫度18~25℃,濕度85%~100%,遮陽網遮光50%,新根生出後去除遮陽網。待苗長出4~5片新葉時,就可以作為原種苗進行移栽種植。

四、病毒檢測

對於每一個由莖尖組織產生的植株,必須經過檢測無病毒,才能作為無病毒原原種繁殖。檢驗草莓苗是否脫除病毒的方法有PCR分子檢測法和指示植物檢測法。

指示植物檢測法需要用UC1、UC5等指示植物,具體方法為:將指示植物和待檢植株栽在小花盆中,並不斷去掉指示植物發出的匍匐莖,使葉柄加粗。當葉柄達到2mm以上的粗度時,先從待檢植株上剪取成熟葉片,剪去兩邊小葉,僅取中間一小葉帶葉柄1.0~1.5cm,用銳利刀片把葉柄削成楔形作為接穗,然後選取健壯的指示植物,剪去中間小葉作為砧木,在兩葉柄中間向下縱切1條長1.5~2cm的切口,再把待檢接穗小葉片插入指示植物切口內。嫁接後為保證成活,用蠟質薄膜或塑料袋包紮嫁接口,每株指示植物可嫁接2個待檢接穗。

嫁接後將整個指示植物的花盆套上塑料袋,以保證濕度。先在25℃的溫度條件下非陽光直射處放置2~3天,然後移到25~28℃、光照充足的環境下,每隔2~3天換一次氣,7~10天後去掉塑料袋,並開始分批去掉未嫁接葉片,促進幼葉發生,4~6周即可鑑定出有無病毒。一般每個待檢植株要接種3株以上,根據指示植物症狀表現,確定病毒種類和侵染程度。

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