一種高效無縫基因拼接技術

雲克隆 發佈 2020-10-28T22:37:39+00:00

隨著PCR技術的出現,人們逐漸的打開通往研究生命本質的大門,這也使PCR技術成為了上個世紀最為偉大的技術之一。通過PCR技術能在體外迅速、大量、靈敏地擴增出目的基因片段,但是需要靈活的改造基因,只有目的基因片段是遠遠不夠的,還需要一種高效的基因加工手段——基因拼接技術。

隨著PCR技術的出現,人們逐漸的打開通往研究生命本質的大門,這也使PCR技術成為了上個世紀最為偉大的技術之一。通過PCR技術能在體外迅速、大量、靈敏地擴增出目的基因片段,但是需要靈活的改造基因,只有目的基因片段是遠遠不夠的,還需要一種高效的基因加工手段——基因拼接技術。在實驗操作過程中,無論出於基因改造、載體改造以及將來會出現的物種改造等多種涉及DNA操作的實驗,都不可避免會使用到基因拼接技術。

1989年Horton等人提出了SOE法(Gene splicing by over lap extension)即通過複製時DNA鏈的交錯延伸來實現基因拼接;1991年Lebedenko等人提出SDL方法(Gene splicing by directed ligation)即直接拼接法。目前常用的基因拼接技術大多數是基於這兩種方式發展而來,這些方法雖然能夠完成基因的拼接,但是表現出來的問題也非常多,主要表現在以下幾個方面:1、外源片段的引入;2、基因出現移碼突變;3、操作繁瑣,拼接成功率低;4、一個反應通常只能完成2個片段的拼接。

針對這一系的問題,武漢雲克隆在核酸酶及其反應體系上經過逾7年的研發,推出了一種高效多基因拼接技術以及配套的技術體系,打破了傳統拼接技術的種種限制,主要表現在以下幾個方面:1、在同一個反應體系中能同時完成3-5個基因片段拼接;2、對於拼接片段適用性廣,200-8000bp的片段都能用於拼接;3、拼接成功率高,普通兩兩拼接≥85%;4、不會帶入任何的外源序列。該技術主要特徵在於(如圖所示),在反應體系中一種核酸酶能非特異的識別DNA 5』-3』端的14-20bp的鹼基,並沿5』-3』進行消化,使DNA形成粘性末端,在退火的情況下粘性末端通過鹼基互補配對連結形成一個整體。

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